模型建立
動物品系:新西蘭兔。
造模方法:生理鹽水沖洗結膜囊,將8 mm直徑濾紙片直接浸泡于1 mol/L NaOH溶液中15 s,置于兔左眼眼角膜正中50 s后取下,迅速用約20 ml生理鹽水沖洗角膜及結膜囊,即刻氧氟沙星滴眼液滴眼,連續滴眼3次。
檢測指標:裂隙燈檢查,角膜新生血管面積 。
堿燒傷致新西蘭兔眼角膜新生血管的影響
角膜本身無血管,毛細血管網圍繞角膜緣,如果血管超越角膜緣進入透明區即為病理性。新生血管結構和功能不完善,容易發生血漿滲漏,造成角膜水腫、脂質沉著以及激發的角膜瘢痕化,嚴重影響視力,也使角膜移植排斥反應的發生率大大增加。
角膜新生血管面積(mm2)
*同一時間點各組與模型對照組比較有統計學差異(P< 0.05)
角膜新生血管長度(mm)
*同一時間點各組與模型對照組比較有統計學差異(P< 0.05)
角膜區域VEGF表達強度和累計面積評分
角膜FITC-Lectin4免疫組化是如何做的,其中角膜FITC-Lectin4是什么?
?角膜FITC-Lectin4免疫組化是一種用于檢測角膜內血管生成的方法?其中FITC是一種熒光素,Lectin4是一種能與血管內皮細胞特異性結合的蛋白質2。
?具體操作步驟如下:
1.取出角膜標本,用生理鹽水沖洗,切成適當大小。
2.用甲醛固定角膜標本15分鐘,然后用PBS洗滌3次。
3.用0.5%的Triton X-100處理角膜標本10分鐘,以增加細胞膜的通透性。
4.用PBS洗滌3次,然后在PBS中加入10%的正常羊血清封閉非特異性結合位點30分鐘。
5.用PBS洗滌3次,然后加入FITC-Lectin4(稀釋比例為1:100)孵育1小時。
6.用PBS洗滌3次,然后在暗處觀察和拍攝熒光圖像。 ?